Primjena Gene Gun u razvoju voća

Trešnja je plod koji relativno zavisi od klime. Tokom razvoja voća, njegovo sazrevanje reguliše apsisična kiselina (ABA).

U ovoj studiji, virusom inducirano utišavanje gena (VIGS) i metodom bombardovanja česticama korištene su za identifikaciju četiri cDNA koje kodiraju 8'-hidroksilazu (ključni enzim za oksidativni katabolizam ABA) u plodovima trešnje. Deoksiribonukleinska kiselina) Paccyp707a1-a4

Paccyp707a2 negativno reguliše dozrijevanje plodova trešnje, a paccyp707a1 posreduje toleranciju na sušu

Virusno indukovano utišavanje gena (VIGS) odnosi se na virus koji inficira biljku koja nosi fragment ciljnog gena, koji može indukovati utišavanje endogenog gena, uzrokovati fenotipske promjene, a zatim proučavati funkciju ciljnog gena na osnovu fenotipske varijacije.

Slika 1. Promjene u biosintezi ABA (pacnced1), ABA katabolizma (paccyp707as) i srodnih gena ABA tokom razvoja i sazrijevanja plodova trešnje. (a) Apsolutni nivo transkripta od četiri pacyp707as tokom razvoja voća. (b) Relativni nivoi transkripta akumulirani pcnced1 i aba tokom razvoja. Actin je korišćen kao unutrašnja kontrola i njegovo izražavanje je detektovano qrt-pcr.

Ekspresija gena pAccyp707a u reakciji dehidracije

Plodovi sakupljeni 32 dana su podeljeni u dve grupe, a brzina gubitka vode 16% pri 45% relativne vlažnosti nakon skladištenja 3 dana u uslovima niske relativne vlažnosti (45%) i visoke relativne vlažnosti (100%). Sadržaj ABA i nivo transkripcije pNCED1 u plodovima bili su značajno veći od onih u kontrolnoj grupi. On kontroliše (Slika 2). Nasuprot tome, ekspresija Paccyp707a1 bila je značajno smanjena nakon dehidracije, a ekspresija Paccyp707a3 je također bila smanjena, iako u manjoj mjeri, a ekspresija Paccyp707a4 i Paccyp707a2 nije bila pod utjecajem dehidracije (Slika 2). Najznačajnija promjena dogodila se u ekspresiji paccyp707a1, koja može biti glavni član porodice paccyp707a gena koji reaguje na sušu tijekom zrenja ploda.

Utišavanje gena Paccyp707A2 promoviše bojenje i sazrevanje voća

Fenotip ploda je tretiran Paccyp707A1 / 2-RNAi. Na dan 28. dana cvetanja, 90 plodova je odabrano od tri trešnje posađene u odvojenim voćnjacima, i podeljene su u tri grupe od po 30, za eksperimente sa sileningom izazvanim virusom.

Paccyp707a1-rnai, paccyp707a2-rnai i kontrolni trv vektor (bez gena cyp707a) su ubrizgavani u pedikele plodova grupa 1, 2 i 3, redom.

Plod je procenjen 7 dana nakon inokulacije.

(a) tretiranje voća (d) 28 dana nakon cvetanja;

(b) 43d za tretiranje voća;

(c) 43d trv vektorski tretman voća (bez gena cyp707a);

(d) 43 d pacyp707a1 RNAi tretiranog voća;

(e) paccyp707a2 RNAi tretman voća;

(f) Paccyp707a2 RNAi tretiran voće 6 dana nakon tretmana (desna kontrola);

(g) paccyp707a1 RNAi 6 dana nakon tretmana voća (kontrolni plod desno).